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液体培养基接种方法解读

时间:2022-09-02 浏览次数:289

  液体培养基(liquidculturemedium),固体培养基的对应词,是微生物或动植物细胞的液状培养基。它具有进行通气培养、振荡培养的优点。在静止的条件下,在菌体或培养细胞的周围,形成透过养分的壁障,养分的摄入受到阻碍。由于在通气或在振荡的条件下,可消除这种阻碍以及增加供氧量,所以有利于细胞生长,提高生产量。




液体培养基接种方法解读


  试管液体接种


  试管液体接种是将一定体积的样品混悬液加入到盛有指/定液体培养基的试管内,或将一定体积、按标准规定条件下培养过的培养液接入盛有指/定液体培养基的试管内(有时是指接种环取一环,或移液管移液器移取一定的体积,例如0.1ml、1ml等)。涉及试管液体接种的操作有MPN法检测大肠菌群/大肠杆菌,以及沙门氏菌、单增李斯特氏菌的二次增菌转接操作等。


  此处以用移液器将一定体积的样品混悬液接入到盛有指/定液体培养基的试管内为例,


  ①用酒精棉消毒操作台面。将移液器吸头盒放入酒精灯右侧,靠近酒精灯放置。将需要进行液体转接的试管插在试管架上,置于酒精灯左边左手附近。将移液器调至合适的刻度放于右手附近的架子上。废物缸放于右手能触及的范围内。


  ②点燃酒精灯,左手于酒精灯火焰附近打开移液器吸头盒,右手持移液器用力插取吸头两下以防吸头松动脱落,拔出移液器并盖上移液器吸头盒盒盖。左手取待转接液体试管,试管底部位于左手手心,移液器吸头和试管口应在酒精灯火焰周围的无菌区域之内。


  ③将试管伸向右手。右手食指,中指,无名指握住移液器,拇指靠在移液器按钮上,小指和掌心下缘合围夹住试管帽并用力拔出。如果操作者的手比较小,可以靠食指无名指和小指握住移液器,拇指仍靠在液体按钮上。而中指向外伸,靠中指内侧和食指、无名指外侧夹住试管帽。将试管口和移液器吸头靠近火焰,试管口灼烧一周,在火焰附近将吸头刚好伸入试管口,抵住试管内壁下侧,同时按住移液器按钮至一档(轻微推不动)。不要将移液器吸头伸到试管底部,而应倾斜试管使液面倾斜至试管口附近并没过吸头尖/端。右手拇指缓慢松开,使液体缓缓吸入洗头,注意不要吸入空气。如果有空气吸入,必须将液体压回试管重新吸取。当右手拇指完全松开时,撤离移液器,注意吸头需尽量一直围绕在在酒精灯火焰附近,并且吸头务必保持向下姿势以防止液体倒流入移液器内部引起污染。


  ④吸完液体后,将移液器撤离试管,移液器吸头移到酒精灯火焰的远离操作者的一侧,将试管口在火焰上灼烧灭菌。


  ⑤灭菌后,右手小指迅速将试管帽盖上,此时移液器吸头仍然要在火焰形成的无菌区域内,不可离酒精灯火焰太远。盖上试管帽将试管归位。


  ⑥左手取待转接入液体的试管,右手保持移液器吸头在酒精灯火焰附近。


  ⑦右手保持握移液器姿势取下试管帽并灼烧管口。将吸头抵靠在试管口的内壁上,缓缓推动移液器按钮至底(完全推至第二档,使残存在吸头尖/端的液体也流出)。推出液体时注意不要将吸头深入试管底部,也不要用力推导致液体飞溅。


  ⑧左手将试管口靠近火焰灭菌,移液器吸头移到酒精灯火焰的另一侧。再次灼烧试管口


  ⑨右手保持握移液器姿势将试管帽盖上,将试管归位。移取液体完毕后,按压移液器滑动杆使吸头脱落至废物缸,移液器放回架子。熄灭酒精灯,将台面消毒并收拾干净。


  三角瓶液体接种


  相对于试管的液体接种培养,三角瓶接种培养的优势在于通气效果好。多见于霉菌或一些细菌的复壮培养或者摇床培养等。操作与前面提到的液体试管接种操作基本相同,最后将液体加入三角瓶的时候,三角瓶倾斜,移液器吸头抵在三角瓶的内壁,缓缓将液体加入,避免喷溅和气泡


  液体培养基接种是用接种环、移液器或吸管等工具,将菌体或菌液移至试管、三角瓶等容器中的液体培养基中的一种接种方法。其操作与前面斜面接种基本相同,但应注意:液体培养基试管管口或三角瓶瓶口略向上以免培养液流出;加入菌体时,应使接种环与管内壁轻轻研磨,使菌体擦下,塞好棉塞后,将试管在手掌心中轻轻敲打或轻轻摇晃三角瓶,使菌体混合均匀。


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