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默克细胞培养扳的相关知识

时间:2022-11-16 浏览次数:97

  细胞培养板紧密贴合的孔盖,可有效防止细胞培养过程中培养基的污染与蒸发的损耗。


  细胞培养板在进行细胞操作时同样遵循严格无菌的原则,各项操作要保证规范、科学,不对细胞的生长造成额外的影响。这其中最常见的问题就是如何保证加样后细胞的均匀和尽量减少换液对细胞生长状态的影响。


  24孔培养板或培养皿的盖子都很松,这样是方便了透气,但是细菌、霉菌等污染物会不会也随着溜进去呢?


  盖子很松,属于半开放培养,这样的目的是透气(实际上是为了使培养皿外的CO2能够与培养皿充分交换,维持培养基的pH值)。


  凡事有利必有弊,这样当然增加了污染的可能性。此外这样还会使培养皿内的液体蒸发,这对于精确定量的药物来说就显得值得注意了。所以以下二条措施是必须的a培养箱内空气必须清洁(定期紫外线照,酒精擦洗,尽量少开关培养箱)b培养箱内的湿度必须始终保持为100%(培养箱内放置无菌蒸馏水的水槽)。


  就好像培养皿,也是一个盖倒扣的容器,也不会污染。主要是因为盖子“L"型边缘产生气流负压的缘故,灰尘上面才附着有微生物,而气流携带的灰尘是无法通过产生负压的盖边缘的。而透气作用只是通过空气的扩散,不会产生气流,所以只会透气不会透菌。


  培养过细胞的人都知道,细胞如何的娇贵,日复一日精心地呵护,一个不慎就全军覆没。细胞培养,从来就不是一个容易的过程。那么关于细胞培养的基本知识你又了解多少呢?


  首先,操作前准备工作:


  1、玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;


  2、无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净,紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;


  3、培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内,用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天,肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置-20度保存;


  4、消化液(pH7.8)或其它加入液,应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌,分装成支置-20度保存;


  5、各种冻存的液体复温时应边摇边融化,否则有的液体(特别是培养基)容易产生沉淀;


  6、培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上,如有高温灭菌的应按程序来菌)。至少每月一次;


  7、进入操作时应注意先清洗双手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作时注意无菌台内空间层次;手及物品不要在暴露的瓶口上方来往,如果数量较多,培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作,瓶与瓶之间应相隔一定的距离,开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧,开开后应用灯先烧口,然后烧盖。用完后同样操作。整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点。



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