一、使用前准备

1. 选型适配

   
   

   根据目标蛋白分子量选截留分子量（MWCO）合适的超滤管，通常不超过目标蛋白分子量的1/3，如35kDa蛋白可选10kDa截留量超滤管。同时，确认超滤膜材质与样本化学性质兼容，按样本体积选容量规格，确保液面不超管顶标识线。

2. 预处理

   
   

   新超滤管可能含保护剂，需用纯水或缓冲液浸泡后离心（1000×g，1分钟）去除残留。将其置于4℃冰箱预冷10分钟，再放冰上预冷2 - 5分钟，防膜变形或蛋白变性。若不立即使用，用20%乙醇浸泡，保持膜湿润，避免干裂长菌。

二、操作流程

1. 加样与平衡

   
   

   倒置离心去除残留水后，轻柔加样本，避免剧烈晃动。将超滤管对称放入离心机转子，确保质量重心平衡，防离心机震动。

2. 离心参数

   
   

   根据规格调整转速（5000 - 12000×g），离心15 - 40分钟，如10kDa截留量超滤管常用12000×g离心30分钟。调低加速度，减少对膜冲击。离心机预冷至4℃，防蛋白变性。离心后检查管底有无蛋白沉淀，有则分析调整。

三、样本收集与后续

1. 回收浓缩液：用移液枪轻柔吸取或倒置离心回收，避免触碰膜面。

2. 置换缓冲液：浓缩至1mL后加新缓冲液，重复3次。

3. 清洗保存：一次性超滤管用后丢弃；可重复使用的经纯水、乙醇清洗消毒，短期用75%乙醇浸泡，长期用20%乙醇保存。

四、注意事项

控制离心力、正确放置方向防膜破损；预留足够样本量防损失；冰上操作、消毒防污染。